[SBI]ゲノム編集ツール「CRISPR-Cas9 」25％OFFキャンペーン

キャンペーン期間中，System Biosciences社(メーカー略称：SBI)のゲノム編集ツール「CRISPR-Cas9 All-in-One Vector」を25％OFFのキャンペーン価格でご提供します。是非この機会をご利用下さい。

[CRISPR-Cas9] guide RNAによる新技術のゲノム編集ツール
PrecisionX Cas9 SmartNuclease System

CRISPR-Cas9システムは，ゲノム中で切断したい領域を切断できる遺伝子改変ツールです。
切断したい標的塩基配列を含むguide RNA (crRNA:tracrRNA) とCas9タンパク質により，ゲノム上の任意の配列を切断します。標的配列のデザインの簡便さや実験手法の容易さから，CRISPRはZFN(Zinc Finger Nuclease)やTALEN(Transcription Activator-Like Effector Nuclease)と並び，注目されるゲノム編集（genome editing）技術です。

■CRISPR-Cas9システムの操作法概略

切断したいDNA配列に対する相補的な配列を含むguide RNA，およびその相補鎖を設計し，それらの断片をCRISPRベクターにクローニングします。作成したCRISPR-Cas9発現プラスミドを目的細胞へトランスフェクションすると，CRISPR-Cas9システムにより標的領域が切断されます。

■CRISPR-Cas9システムの特長

• guide RNA (crRNA:tracrRNA)およびCas9タンパク質は1つのCRISPRベクターから発現できるため，細胞への導入が必要となるCRISPRベクターは1種類のみです。
• CRISPRベクターは線状化されているため，ライゲーションが容易に行えます。
• プロモーターの異なる5種類のCRISPRベクターがあります。
• 10反応分の量が含まれています。

■CRISPR-Cas9発現プラスミドのベクターマップ

■CRISPR-Cas9システム用の配列のデザイン方法

標的配列は，末端に「GG」が配置されている領域を選択していただき，NGGの上流20塩基で設計します。切断したい標的配列を含むgRNAおよびその相補鎖をオリゴ合成等で作成していただきます。

※オリゴDNA合成受託サービスはこちら。

■CRISPR-Cas9システムの適用例

CRISPR-Cas9システムでの切断後，ゲノムの切断された部分では，塩基の置換や欠損が誘引され，これにより遺伝子のノックアウトができます。また，切断した部位に特定の配列をノックインしたい場合には，その目的配列を含むドナーベクターを一緒にトランスフェクションすると，相同組換えによりその断片をノックインすることができます。

• 遺伝子のノックイン，ノックアウトへの利用
• ゲノム中の任意の位置の改変

■CRISPR-Cas9システムのキット内容

• Lenearized Cas9 Smart Nuclease vector
• Ligation buffer
• Fast ligase
• Fwd Sequecing primer

■CRISPR-Cas9 システム 関連文献

MEMO

The CRISPR-Cas9 Technology

The recent discovery of the type II prokaryotic CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) system, originally discovered in the bacterium Streptococcus pyogenes that works as a mechanism to defend against viruses and foreign DNA, has provided%; a revolutionary tool for targeted genome engineering with simple elegance. The system uses a nuclease, CRISPR-associated (Cas9), that complexes with small RNAs as guides (gRNAs) to cleave DNA in a sequence-specific manner upstream of the protospacer adaptor motif (PAM) in any genomic location. The CRISPR-Cas9 system is comprised of separate guide RNAs known as the crRNA and tracrRNA. These two separate RNAs have been combined into a single RNA to enable site-specific mammalian genome cutting through the design of a short guide RNA. SBI has built a series of all-in-one CRISPR-Cas9 cloning vectors with different promoter options. These cloning vectors will express a human codon-optimized Cas9 nuclease as well as any gRNA sequence of your choice linked to the tracrRNA. Simply design the gRNA for the genome target DNA sequence and clone into the Cas9 SmartNuclease vector for efficient genome engineering.

■CRISPR-Cas9システム使用例

Luciferase切断用CRISPRベクターを用いてLuciferase発現293細胞におけるLuciferaseを切断した解析例 CRISPR-Cas9システムを用いてLuciferase切断を標的とするguide RNAを組み込んだCRISPRベクターを作成し，Luciferase発現細胞にトランスフェクションし，切断効果を検証した。Guide RNAは標的配列の異なる2種類’(gRNA1およびgRNA2)を作成した。
A) Luciferase活性測定による検証。Negative controlに対して，gRNA1およびgRNA2ではLuciferase遺伝子の破壊による活性の低下が見られた。
B)Surveyor Assayを行ったところ，gRNA1およびgRNA2においてそれぞれ30%および22％の切断効果が見られた。

Luciferase切断用CRISPRベクターおよびRFPドナーベクターを用いてRFP遺伝子をノックインした解析例
gRNA1およびgRNA2のどちらにおいても切断部分にRFPドナーベクターが組み込まれた。

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CRISPR-Cas9 システム ＜特集＞

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※上記(#CAS900A-1,#CAS920A-1,#CAS940A-1,#CAS960A-1,#CAS980A-1)以外の製品は，キャンペーン対象外です。